細胞計數(shù)一般用血細胞計數(shù)板,按白細胞計數(shù)方法進行計數(shù),便于確定細胞的生活狀況。在細胞培養(yǎng)工作中,常需要了解細胞生活狀態(tài)和鑒別細胞死活,確定細胞接種濃度和數(shù)量以及了解細胞存活率和增殖度,如用酶消化制備的細胞懸液中細胞活力的鑒別,凍存細胞復(fù)蘇后的活力檢測等。
細胞懸液制備后,常用活體染料臺盼藍對細胞進行染色,進行細胞計數(shù)。臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高,可使染料進入細胞內(nèi)而使細胞著色(藍色)。
細胞懸液細胞數(shù)/ml=4個大格細胞總數(shù)/4×10,000。如計數(shù)前已稀釋,可再乘稀釋倍數(shù)。
計數(shù)時,只計數(shù)完整的細胞,若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數(shù)。在一個大方格中,如果有細胞位于線上,一般計下線細胞不計上線細胞,計左線細胞不計右線細胞。二次重復(fù)計數(shù)誤差不應(yīng)超過±5%。鏡下觀察,凡折光性強而不著色者為活細胞,染上藍色者為死細胞。
注意事項:
1.務(wù)必使分散成單個細胞,取樣計數(shù)前,充分混勻細胞懸液。
2.顯微鏡下計數(shù)時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應(yīng)按單個細胞計算。如果細胞團>10%,說明細胞分散不充分。
3.置顯微鏡下計數(shù)四角大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。對于壓線的細胞只計數(shù)在上線和左線者,對于細胞團按單個細胞計數(shù)。